Содержание
- Главное отличие
- Саузерн-блоттинг против Вестерн-блоттинг
- Сравнительная таблица
- Что такое Саузерн Блоттинг??
- Что такое вестерн-блоттинг?
- Ключевые отличия
- Заключение
Главное отличие
Основное различие между Саузерн-блоттингом и Вестерн-блоттингом заключается в том, что Саузерн-блоттинг - это метод, который используется для обнаружения определенного фрагмента ДНК в данном образце, тогда как Вестерн-блоттинг используется для обнаружения конкретного белка в данном образце.
Саузерн-блоттинг против Вестерн-блоттинг
Блоттинг - это метод, который используется учеными для отделения различных типов молекул от смеси или образца. В этом методе макромолекулы, такие как нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК) и белки в смеси, перемещаются через кусок геля. Здесь мельчайшие частицы будут двигаться быстрее, чем более крупные. Эти молекулы прижимаются к поверхности иммобилизованной мембраны, которая переносит молекулы на мембрану. Существуют различные типы блоттинга на основе обнаружения конкретного материала, то есть южный блоттинг, северный блоттинг и вестерн-блоттинг. Саузерн-блоттинг - это тип блоттинга, который используется для обнаружения ДНК, в то время как вестерн-блоттинг используется для обнаружения белка. Саузерн-блоттинг был разработан Эдвардом М. Южным в 1975 году. Итак, он известен как Саузерн-блоттинг. С другой стороны, вестерн-блоттинг был разработан группой Джорджа Старка в Стэнфордском университете в 1979 году. Это название использовалось для совпадения с южным блоттингом. Саузерн-блоттинг используется для определения конкретной последовательности ДНК, тогда как вестерн-блоттинг используется для определения конкретной последовательности аминокислот или белков.
Сравнительная таблица
| Саузерн-блоттинг | Вестерн-блоттинг |
| Методика, которая используется для определения конкретной последовательности ДНК в данной смеси, называется саузерн-блоттингом. | Методика, используемая для определения определенной аминокислотной последовательности белка в данной смеси, называется саузерн-блоттингом. |
| Разработано | |
| Саузерн-блоттинг был разработан Эдвардом М. Южным в 1975 году. | Вестерн-блоттинг был разработан группой Джорджа Старка в Стэнфордском университете в 1979 году. |
| Тип обнаружения | |
| Саузерн-блоттинг используется для определения конкретной последовательности ДНК. | Вестерн-блоттинг используется для определения конкретной аминокислотной или белковой последовательности. |
| Принцип | |
| Работает по принципу гибридизации. | Он работает по принципу метода иммунодетекции или взаимодействия антиген-антитело. |
| зонд | |
| В качестве зонда используется одноцепочечная ДНК или иногда РНК. | Первичные и вторичные антитела используются в качестве зонда. |
| Гель-электрофорез | |
| Электрофорез в агарозном геле используется при Саузерн-блоттинге. | SDS PAGE / полиакриламидный гель, используемый для разделения белков при вестерн-блоттинге |
| Процедура блоттинга | |
| Саузерн-блоттинг следует процедуре капиллярного переноса. | Вестерн-блоттинг следует процедуре передачи электроэнергии. |
| Образец | |
| Во время Саузерн-блоттинга образец должен быть денатурирован. | Во время вестерн-блоттинга образец должен быть в своем родном состоянии. |
| блокировка | |
| Никакой шаг наподобие блокирования не связан с южным блоттингом. | Во время вестерн-блоттинга сайты неспецифических антител блокируются на нитроцеллюлозной бумаге с помощью сухого молока или бычьего сывороточного альбумина (BSA). |
| Методы маркировки | |
| Обычными методами маркировки, которые используются при саузерн-блоттинге, являются использование хромогенных красителей или радиоактивная метка или флуоресцентная маркировка и т. Д. | Методы маркировки, используемые в вестерн-блоттинге, включают использование флуоресцентно меченных антител или радиоактивной метки, хромогенных красителей или образование диаминобензидина и т. Д. |
| Методы обнаружения | |
| Обнаружение света, авторадиография и изменение цвета используются в качестве методов обнаружения при саузерн-блоттинге. | Методы обнаружения при вестерн-блоттинге - это изменение цвета, обнаружение света и т. Д. |
| заявка | |
| Саузерн-блоттинг используется для обнаружения ДНК, тестирования отцовства, аппликатуры ДНК, идентификации жертв, выявления преступников, обнаружения инфекционных агентов и выявления мутаций или перегруппировки генов и т. Д. | Вестерн-блоттинг используется для определения количества белка в смеси, для обнаружения присутствия ВИЧ, вирусов, бактерий и т. Д. В сыворотке, для обнаружения дефектных белков и используется в качестве определенной меры для герпеса, гепатита В, Лайма болезнь Крейтцфельдта-Якоба и др. |
Что такое Саузерн Блоттинг??
Саузерн-блоттинг является самым старым методом блоттинга, который был дан Эдвином Саузерном, таким образом, названным как Саузерн-блоттинг. Он используется для определения конкретной последовательности ДНК в данном образце или смеси. Шаги, включенные во время саузерн-блоттинга, включают электрофорез, перенос и обнаружение определенных последовательностей. Прежде всего, ДНК фрагментируется с помощью специфического фермента рестрикции. Затем желаемые фрагменты ДНК разделяют с помощью гель-электрофореза. Эти фрагменты денатурируют с помощью щелочного раствора, например, NaOH и т.д., чтобы отделить две цепи ДНК. Эти одноцепочечные фрагменты ДНК затем переносятся на мембрану посредством процесса блоттинга. Затем эту мембраносвязанную ДНК обрабатывают меченым зондом. Этот зонд прикрепляется к своей комплементарной цепи на мембранной ДНК, которая может быть визуализирована с помощью авторадиограммы и т. Д.
Что такое вестерн-блоттинг?
Метод вестерн-блоттинга был изобретен группой Джорджа Старка в Стэнфордском университете, которая используется для идентификации определенной последовательности аминокислот в белке. Это также известно как белковое пятно или иммуноблоттинг. Этапы во время вестерн-блоттинга - электрофорез, перенос и обнаружение специфических белков. Прежде всего, гомогенизировать смесь. Затем отделяют интересующую молекулу с помощью электрофореза. Перенесите эти молекулы на мембрану и идентифицируйте конкретный белок с помощью специального зонда.
Ключевые отличия
- Методика, которая используется для определения конкретной последовательности ДНК в данной смеси, известна как Саузерн-блоттинг, тогда как методика, которая используется для определения конкретной последовательности аминокислот белка в данной смеси, называется Саузерн-блоттингом.
- Саузерн-блоттинг был разработан Эдвардом М. Южным в 1975 году, так называемый Саузерн-блоттинг. С другой стороны, вестерн-блоттинг был разработан группой Джорджа Старка в Стэнфордском университете в 1979 году.
- Саузерн-блоттинг используется для определения конкретной последовательности ДНК. И наоборот, вестерн-блоттинг используется для определения конкретной аминокислотной или белковой последовательности.
- Саузерн-блоттинг работает по принципу гибридизации с обратной стороны; вестерн-блоттинг работает по принципу метода иммунодетекции или взаимодействия антиген-антитело.
- Одноцепочечная ДНК или иногда РНК используется в качестве зонда при Саузерн-блоттинге с другой стороны, при вестерн-блоттинге первичные и вторичные антитела используются в качестве зонда.
- Электрофорез в агарозном геле используется при саузерн-блоттинге, в то время как SDS PAGE / полиакриламидный гель используется для разделения белков при вестерн-блоттинге.
- Саузерн-блоттинг следует за процедурой переноса капилляров, с другой стороны; вестерн-блоттинг следует процедуре передачи электроэнергии.
- Во время Саузерн-блоттинга образец должен быть денатурирован, тогда как во время Вестерн-блоттинга образец должен быть в своем нативном состоянии.
- Никакой шаг, такой как блокирование, не участвует в южном блоттинге с обратной стороны, во время вестерн-блоттинга неспецифические сайты антител блокируются на нитроцеллюлозной бумаге с помощью сухого молока или бычьего сывороточного альбумина (BSA).
- Обычные методы маркировки, которые используются при саузерн-блоттинге, включают использование хромогенных красителей или радиоактивной метки или флуоресцентной маркировки и т. Д., В то время как методы маркировки, используемые в вестерн-блоттинге, включают использование флуоресцентно меченных антител или радиоактивной метки, хромогенных красителей или образование диаминобензидина и т.д.
- Обнаружение света, авторадиография и изменение цвета используются в качестве методов обнаружения при саузерн-блоттинге, тогда как методы обнаружения при вестерн-блоттинге - это изменение цвета и обнаружение света и т. Д.
- Саузерн-блоттинг используется при обнаружении ДНК, тестировании на отцовство, проверке ДНК, идентификации жертв, идентификации преступников, обнаружении инфекционных агентов и выявлении мутаций или перегруппировке генов и т. Д. И наоборот, вестерн-блоттинг используется для определения количества белка в смесь, чтобы обнаружить присутствие ВИЧ, вирусов, бактерий и т. д. в сыворотке, чтобы обнаружить дефектные белки и использовать в качестве определенной меры для герпеса, гепатита В, болезни Лайма, болезни Крейцфельдта-Якоба и т. д.
Заключение
Вышеизложенное подводит итог, что саузерн-блоттинг является самой старой техникой блоттинга, используемой для определения конкретного сегмента ДНК в образце, тогда как вестерн-блоттинг был обнаружен последним и использовался для идентификации конкретной последовательности аминокислот или конкретного белка.
